糕點是固相高效深受人們喜歡的一種食品，它以麵粉、液相米粉、色谱时测糖、法同蛋、定糕点中的研乳製品、种添油脂等為主要原料，加剂究配以多種輔料、固相高效餡料、液相調味品經過一定工藝製作而成，色谱时测為了提高糕點的法同外觀、口感及延長食品的定糕点中的研防腐保質期，商家往往會添加一些食品添加劑，种添以此增加糕點的加剂究商業價值，有研究發現有些食品添加劑在混合使用時可能會產生聯合毒性作用，固相高效比如糖精鈉、檸檬黃分別與苯甲酸鈉聯合作用於L-929細胞中，可表現出毒性相加作用，因此，在GB2760-2014《食品添加劑使用標準》中明確規定糕點等食品使用添加劑的限量。
目前，國內外食品添加劑多組分同時檢測的方法主要有高效液相色譜法、液相色譜一質譜法、離子色譜法、氣相色譜法等，由於液相色譜一質譜法儀器昂貴，樣品基質對分析成分以及儀器影響都較大，離子色譜法以及氣相色譜法對樣品前處理要求比較高，且檸檬黃、誘惑紅等人工合成色素采用離子色譜法難處理，防腐劑和甜味劑等添加劑的前處理方法不同，采用氣相色譜法檢測，前處理複雜，同時也會使樣品的提取效率低，回收偏低，已不能滿足分析需要，雖然高效液相色譜法的通用性會造成部分人工合成色素以及防腐劑出現假陽性，但是可以通過PAD光譜對照品與假陽性樣品進行比對確認，因此，鑒於上述情況，通過試驗建立一種能夠同時檢測糕點中多種食品添加劑的檢測方法顯得十分必要。
本研究主要是針對糕點中的新紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、納他黴素、富馬酸二甲酯等13種食品添加劑同時檢測，采用液相色譜法進行檢測，優化前處理方法以及色譜條件，對常見的人工合成色素、防腐劑以及甜味劑在糕點的檢測應用中實現同時檢測，提高檢測效率，降低檢測成本，完善食品檢驗方法，有助於在食品檢驗中進行推廣。
一、材料與方法
1、材料與試劑
樣品來源：分別購於南寧市糕點店（3家）及超市（2家）共計8個批次；
試劑：甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）均為默克股份兩合公司；乙酸銨（優級純）：廠家為上海麥克林生化有限公司；亞鐵氰化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純）：廠家均為國藥集團有限公司；
固相萃取小柱QasisWAX：廠家為Waters公司；微孔濾膜：0.45ktmGHP，廠家為Waters公司。
對照品的來源：新紅批號G119769，含量88.9％、胭脂紅批號146544，含量89.8％、亮藍批號125123，含量91.6％、赤蘚紅批號171572，含量86％、靛藍批號B0003270，含量90％、El落黃批號136871，含量90.5％、山梨酸批號50112，含量99.0％均由Dr．EhrenstroferGrnbH提供；脫氫乙酸批號80430100，含量99.0％、富馬酸二甲酯批號B0003190，含量99.9％、糖精鈉批號201501，含量100％ANPEL提供；苯甲酸批號21228，含量99.9％、納他黴素批號B0002455，99％由Bepure提供。
儀器：Waterse2695高效液相色譜儀帶PDA2998檢測器美國Waters公司lUNIVERSAL320R低溫離心機；Multivap氮吹儀；MilIi-QA10純水機Millipore公司。
2、方法
（1）對照品儲備溶液的製備
精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅、靛藍、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他黴素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL；精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL。
（2）標準混合使用液的配製
精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅、靛藍、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他黴素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL。
精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍、誘惑紅、靛藍、胭脂紅、山梨酸、納他黴素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。
（3）標準線性的配製
取精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅、靛藍、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他黴素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL。
精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍、誘惑紅、靛藍、胭脂紅、山梨酸、納他黴素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度的標準混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分別置5mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得標準係列1～5的標準混合使用液。
（4）樣品的製備
稱取粉碎均勻的糕點樣品2.5g置50mL離心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液和5mL219g/L乙酸鋅溶液，渦旋10min後，加水定容至50mL，經10000r/min冷凍離心10min後取出，量取上清液5mL過QasisWAX固相萃取小柱（預先經3mL甲醇以及3mL水活化），棄去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL純化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脫並收集於15mL離心管中，在40℃水浴中氮吹至近幹後取出放置室溫，用5mL水複溶殘渣，過0.45μmGHP微孔濾膜後，待測。
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