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正交實驗因素水平見表1

时间:2025-05-05 05:44:12来源:

(7)單因素試驗

紅花籽粕的蛋白水解度和還原力為試驗指標,以超聲時間、酶酶超聲溫度、解红pH、花籽酶用量為試驗因素,工艺做單因素試驗,条件分析各因素對紅花籽粕的研究水解度和還原力的影響。

(8)正交試驗

在單因素試驗的蛋白基礎上,對影響蛋白酶的酶酶水解度和還原力的主要因素超聲時間、超聲溫度、解红pH、花籽酶用量等進行L9(34)正交試驗,工艺以確定蛋白酶酶解的条件最佳的工藝條件。正交實驗因素水平見表1。研究


二、蛋白實驗結果與分析

1、L-酪氨酸標準曲線

在波長275nm下,測得吸光度A,結果如表2。

以L-酪氨酸濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標得L-酪氨酸標準曲線圖1。

由圖1得出L-酪氨酸標準曲線方程為:Y=0.0175X-0.0024,R²=0.9998,R²>0.997表明L-酪氨酸在0-60μg/mL濃度範圍內線性關係良好。

2、超聲波處理前後蛋白酶的變化

分析三種蛋白酶未經超聲處理和超聲處理的酶活力的變化,根據(1)公式計算出酶活力。

實驗結果表明,木瓜蛋白酶的活性提高了2.96倍,枯草芽孢杆菌中性蛋白酶提高了1.91倍,胰蛋白酶的活性提高了1.17倍,木瓜蛋白酶的活性提高最快,試驗結果證明在55℃條件下用超聲波處理10min促進了酶的分解,提高了蛋白酶的活力,由數據看出木瓜蛋白酶提升最快,所以選取木瓜蛋白酶進行工藝研究。

3、單因素實驗

(1)超聲時間對紅花籽粕水解度的影響

在酶用量為2.9%、pH7.0、超聲溫度為55℃的條件下,分別測超聲時間為5min、10min、15min、20min、25min的情況下水解1h,其水解度和還原力結果如圖2、圖3所示。

由圖2,圖3可知,超聲時間的改變水解度和還原力都受到了影響,水解度在超聲時間為10min的時候最大,之後的隨著時間增長,還原力下降明顯,可能是酶失活,水解度下降;還原力在超聲時間為15min的時候最大,其還原力最強。綜合考慮,認為超聲時間10min最為合適。

(2)超聲溫度的對紅花籽粕水解度的影響

在酶用量為2.9%、pH7.0、超聲時間為10min的條件下,分別測超聲溫度為35℃、45℃、55℃、65℃、75℃的情況下水解1h,其水解度和還原力結果如圖4、圖5所示。

由圖4可知,先是隨著超聲溫度的增加,紅花籽粕的水解度增大,在超聲溫度是65℃時,水解度最大,然後開始出現下降趨勢,說明在65℃左右時可能是由於熱變性引起的水解度最大;由圖5可知,先是隨著超聲溫度的增加,紅花籽粕的還原力增大,在超聲溫度是55℃時,還原力最大,然後開始出現下降趨勢,但是下降不明顯。綜合考慮水解度、還原力等因素,認為最合適超聲溫度為65℃。

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