取0.1 mL二茂鐵標準溶液和1 mL不同濃度（3.15～44.15 mmol/L）的過氧化氫異丙苯溶液於不同的試管中，加入用異丙醇定容至5 mL，茂铁加入0.1 mL甲酸後用異丙醇定容至5 mL。检测建立在60℃的植物值方恒溫水浴條件下加熱40 min，結束後立即用流動水冷卻至室溫，油过氧化使用異丙醇校準基線在310 nm處檢測吸光度值，利用通過二茂鐵與過氧化氫異丙苯在不同摩爾比時的茂铁吸光度確定二者反應的飽和摩爾比。
試管中加入1 mL二茂鐵標準溶液後，加入1 mL濃度為15.77 mmol/L的植物值方過氧化氫異丙苯溶液，然後分別加入0.1 mL有機酸（甲酸，油过氧化乙酸）和無機酸（硫酸），利用異丙醇定容至5 mL。茂铁60℃的检测建立恒溫水浴鍋中反應40 min，反應完成後在200～600 nm下進行全波長掃描。植物值方
選擇30，40，50，60，70℃5組不同的溫度。每個樣品中分別加入1 mL二茂鐵標準溶液和1 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，加入0.1 mL甲酸後用異丙醇定容至5 mL，在不同的反應溫度下加熱40 min，反應後冷卻至室溫在310 nm處進行檢測。設置10，20，30，40，50 min反應時間，同樣的反應條件下在310 nm處檢測吸光度變化。
取0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液於試管中，加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL甲酸，異丙醇定容至5 mL，在最佳檢測條件下以過氧化氫異丙苯的濃度(x)為橫坐標，吸光度值(y)為縱坐標繪製標準曲線。按式（2）計算油脂過氧化值。
式中：
PV——過氧化值，mmol/kg；
Y——樣品的吸光度；
B——空白的吸光度；
A——標準曲線的係數；
M——取樣量，g；
參照文獻的方法確定二茂鐵法的檢出限。在玻璃管種分別加入0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 mL的1.58 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL（相當於樣品中過氧化氫異丙苯濃度為0.00，0.03，0.06，0.10，0.13，0.16，0.19，0.22，0.252，0.28，0.32 mmol/L）。在恒溫水浴鍋中60℃加熱40 min，加熱結束後立即用流動水冷卻至室溫，在310 nm處檢測其吸光度。得到檢出限的估計值後按照加標濃度為估計檢出限的1～5倍範圍確定過氧化氫異丙苯添加量，在幹淨的試管中加入合適的過氧化氫異丙苯溶液（15.77 mmol/L），再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃下加熱40 min，加熱結束後立即用流動水冷卻至室溫，在310 nm處檢測吸光度值，共檢測7組平行。根據式（3）求得方法檢出限，以方法檢出限的3.3倍為定量限。
式中：
LD——方法檢出限，mmol/L；
s——加標樣品測試結果的標準偏差；
t——自由度為n-1時的Student's值，可查值表得到，當n=7時，在99%置信區間（α=0.01）下，t=3.14；
n——加標樣品數量，一般取7。
在試管中分別加入1 mL空白油樣、低加標油樣（3.15 mmol/L過氧化氫異丙苯）、中加標油樣（7.89 mmol/L過氧化氫異丙苯）、高加標油樣（12.62 mmol/L過氧化氫異丙苯），再加入1 mL二茂鐵標準溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃條件下加熱40 min，然後在310 nm下檢測樣品的吸光度值。
按GB 5009.227—2016執行。
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