目的测定采用HPLC法同時測定和胃降逆膠囊中大黃素和齊墩果酸的含量。方法采用AgilentZorbaxSB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，和胃5μm），降逆胶囊流動相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液（85∶15），大黄梯度洗脫，素和流速1mL·min-1，齐墩檢測波長210nm。果酸結果大黃素和齊墩果酸的测定峰麵積與進樣量間的線性關係良好，r均超過0.9993，和胃RSD不超過2%，降逆胶囊平均回收率均大於95%。大黄結論所用方法重複性好、素和回收率高，齐墩適用於和胃降逆膠囊的果酸質量控製。

和胃降逆膠囊為臨床常用中成藥，测定主要由朱砂七、天仙藤、赭石、老龍皮、楤木、蒲公英等藥材組成，具有活血理氣、清熱化淤、和胃降逆的功效。處方中的朱砂七是“太白七藥”中的名貴品種，主治“七勞五傷”；天仙藤具有活血止痛、利水消腫，解毒的功效；赭石可以用於胃氣上逆嘔吐、呃逆、噫氣；楤木可發揮鎮痛、抗炎、護肝等藥理作用；而老龍皮具有抗氧化作用；蒲公英則具有抗腫瘤、抗氧化的功效。和胃降逆膠囊在臨床上主要用於治療多種胃炎、胃食管反流等，與其他藥物聯用也可治療食欲不振

。參考課題組對於其他處方中成分的含量測定，現采用HPLC法同時測定和胃降逆膠囊中大黃素和齊墩果酸兩種有效成分的方法，有利於和胃降逆膠囊的質量控製。

1實驗部分

1.1儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀、ΜV-1750型紫外分光光度計。大黃素、齊墩果酸對照品（110756-201512、110709-201607）；和胃降逆膠囊方中所有藥材；和胃降逆膠囊（自製，規格：0.4g）；水為純化水；甲醇、磷酸為色譜純；其餘試劑為分析純。

1.2方法與結果

1.2.1色譜條件

采用AgilentZORBAXSB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液，梯度洗脫（0～15min、30%～85%甲醇，15～30min、85%甲醇），檢測波長210nm，流速為1mL·min-1，柱溫為室溫，進樣量10μL。

1.2.2溶液的製備

參照2015年版《中國藥典》中一清膠囊項下大黃的測定方法製備供試品溶液。取4粒樣品內容物，研細混勻，取約1.0g，精密稱定，加20mL甲醇，混勻，靜置30min，濾過，濾液蒸幹，殘渣加10mL2.5mol·L-1硫酸溶液，超聲處理（250W，50kHz）5min，轉移至100mL錐形瓶中，再加15mL三氯甲烷，於70℃水浴上加熱回流30min，冷卻，轉移至分液漏鬥中，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷加熱回流酸液（10mL×2），每次20min，分取三氯甲烷液，酸液再用10mL三氯甲烷振搖提取，合並三氯甲烷液，蒸幹，甲醇溶解殘渣，轉移至50mL量瓶中，加甲醇定容，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

分別對供試品溶液製備過程中的水解時間和提取次數進行了驗證，以峰麵積與取樣量比值為評價指標，比值越大，說明水解越完全，提取越徹底。結果水解30min和提取2次後，峰麵積與取樣量的比值不再增加，說明已經水解和提取完全，結果與《中國藥典》中的方法一致。分別精密稱取0.5mg大黃素、0.7mg齊墩果酸對照品，置小燒杯中，加甲醇溶解，超聲30min，使徹底溶解，冷卻至室溫，轉入10mL量瓶中，加甲醇定容，製得大黃素、齊墩果酸終濃度分別為50、70μg·mL-1的混合對照品溶液。按照處方製備不含老龍皮、楤木和朱砂七的陰性樣品，按上述方法操作，即得不含相關藥材的陰性對照溶液。

1.2.3專屬性的試驗

分別取供試品、對照品和陰性對照溶液，在“1.2.1”項色譜條件下分別進樣，記錄色譜圖。陰性樣品在大黃素與齊墩果酸色譜峰相應的位置上未檢出色譜峰，表明處方中其他藥材的成分不會幹擾測定（圖1）。

1.2.4線性關係的考察

吸取3、6、9、12、15、18μL含大黃素與齊墩果酸的混合對照品溶液，進樣測定。以進樣量為橫坐標、峰麵積為縱坐標，繪製標準曲線，得大黃酸、齊墩果酸的回歸方程為：Y1=2.0706×103X-2.6883×105（r2=0.9997）、Y2=947.08X-1.6826×105（r2=0.9998），線性範圍分別為0.1533～0.9198、0.2133～1.2798μg。

1.2.5精密度、穩定性、重複性的考察

分別精密取10μL大黃素、齊墩果酸混合對照品溶液進樣，共6次，記錄峰麵積，計算得大黃素、齊墩果酸峰麵積的RSD分別0.80%、0.82%，表明精密度良好。取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h時測定峰麵積，計算得大黃素、齊墩果酸峰麵積的RSD分別0.50%、0.80%，表明供試品溶液在10h內穩定性較好。取同一批樣品共6份，按“1.2.2”項方法製成供試品溶液，分別精密量取10μL進樣，記錄峰麵積，按外標法計算樣品中大黃素和齊墩果酸的含量。6次含量測定的平均含量分別為2.944、4.099mg·g-1，RSD分別為1.65%、1.73%。

1.2.6加樣回收率的考察

取同一批樣品，共6份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入44.6μg·mL-1大黃素、296μg·mL-1齊墩果酸對照品溶液1mL，分別按“1.2.2”項方法製備供試品溶液，取10μL進樣，記錄峰麵積，按外標法計算樣品中大黃素和齊墩果酸的含量並計算回收率（表1）。回收率和RSD均在合理範圍內，符合含量測定的要求。

1.2.7樣品的含量測定

取3批和胃降逆膠囊，按“1.2.2”項方法製備供試品溶液，分別進樣測定，記錄峰麵積，通過外標法計算大黃素和齊墩果酸的含量。3批樣品中，每粒分別含大黃素1.18、1.18、1.19mg、齊墩果酸1.63、1.63、1.64mg。

2討論

朱砂七是和胃降逆膠囊中的主藥，其主要有效成分是大黃素，而老龍皮和楤木是輔藥，其主要有效成分都含有齊墩果酸，因此，選擇大黃素和齊墩果酸作為含量測定的指標。大黃素是一種蒽醌衍生物，而齊墩果酸屬於三萜皂苷，二者皆可溶解於甲醇中，都具有酸性，酸化濾液殘渣後酸性物質以遊離形式存在，再用三氯甲烷回流，大黃素和齊墩果酸會進入氯仿層，分取有機層，重複多次操作，則可充分提取樣品中的大黃素和齊墩果酸。對大黃素和齊墩果酸在200～400nm掃描，在210nm處大黃素和齊墩果酸均有強吸收，因此，設定210nm為檢測波長。文中所用方法操作簡單、結果準確可靠，可更好地控製和胃降逆膠囊的質量。

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